Comment tester le taux de cannabinoïdes du cannabis?
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Comment faire une chromatographie sur couche mince
Une question se pose parfois quant aux types de tests réalisés pour déterminer si une variété de cannabis produit d'importantes concentrations de cannabinoïdes, et en quelles quantités (plus ou moins approximatives comme nous le verrons) ces substances sont présentes dans un échantillon. Dans cet article nous vous expliquerons pas à pas comment réaliser une chromatographie sur couche mince (CCM, TLC en anglais), qui nous donnera un pourcentage approximatif des principaux cannabinoïdes détectés dans chaque échantillon. Pour ce faire, nous sommes partis de 8 échantillons différents de la variété de cannabis Jack el Frutero de Philosopher Seeds, afin de savoir lesquels des 8 phénotypes analysés présentent de grandes concentrations en cannabinoïde CBD.
L'usage médical du cannabis s'est très fortement intensifié ces dernières années, de même que l'intérêt de la part des breeders et cultivateur de connaitre les quantités exactes de cannabinoïdes produits par leurs variétés de cannabis préférées. C'est pour cette raison que des termes comme "chromatographie sur couche mince" ou "chromatographie en phase gazeuse" nous sont chaque jour plus familières. Pour en savoir plus sur ces méthodes d'analyse, un ami et collaborateur d'Alchimia nous explique pas à pas le système de chromatographie sur couches minces Alpha-Cat grâce auquel nous obtiendrons rapidement des résultats fiables.
Matériel nécessaire pour analyser son cannabis
Pour réaliser le protocole d'analyse des échantillons nous aurons besoin du matériel suivant:
- Des plaques pour chromatographie sur couche mince, qui peuvent être en aluminium, en verre ou en plastique, toujours couvertes d'un matériau solide absorbant (silice ou alumine)
- Un solvant, pour cet article nous avons utilisé de l'Héxane
- Une micropipette de laboratoire
- De l'eau distillée
- Un réactif, ici sous forme de sel ?Fast Blue B?
- Un éluant, dans cet exemple du Chloroforme
- Du papier absorbant, des microtubes, des bocaux en verre, un plateau, une pipette, un crayon gris
Préparation de l'échantillon de cannabis à analyser
Avant de commencer, quiconque souhaite réaliser ce type de test nécessitant l'usage de produits chimiques doit prendre connaissance des règles de sécurité du travail en laboratoire. Aussi, comme toujours lorsque nous souhaitons réaliser tout type d'expérience, nous devrons travailler dans un environnement aussi propre et stérile que possible, afin de ne pas altérer ou fausser les résultats.
Pour la préparation, nous mélangeons 1ml de solvant (Héxane) pour chaque 0.1 gr d'échantillon dans un microtube. Nous agitons le tube pendant 20 secondes et laisserons se dissoudre son contenu au moins 3 minutes avant de poursuivre. Pendant tout le processus, notre collaborateur insiste sur l'importance d'un étiquetage scrupuleux de chaque échantillon, ceux ci pouvant facilement être mélangés pendant les différentes manipulations à venir. une fois l'échantillon prêt, nous en prélevons 0.2 microlitres avec la micro-pipette, que nous déposons sur un point préalablement tracé au crayon sur la plaque, sur la partie inférieure de celle ci. Pour notre analyse, nous avons analyser les cannabinoïdes de 4 phénotypes de Jack El Frutero par plaque, soit 2 plaques. Nous déposons les 8 micro gouttes sur les deux plaques (4+4) et nous pouvons passer à l'étape suivante.
Décarboxylation et analyse des échantillons
Ensuite, nous devons procéder à la décarboxylation des échantillons de cannabis. Pour cela, nous disposons les deux plaques avec les 8 micro gouttes dans un plat Pyrex, que nous placerons au four à 120-140º pendant environ 5-10 minutes. Pendant ce temps nous préparons deux bocaux de verre (un par plaque) au fond desquels nous déposons 2ml de chloroforme par bocal. À présent nous plaçons délicatement chaque plaque dans son bocal, de façon à ce que seule la partie inférieure des plaques, où sont situées les micro gouttes, soit en contact avec l'éluant. Il est important d'observer comment celui ci remonte la plaque, si ce processus n'est pas uniforme, il sera préférable de ne pas poursuivre l'analyse avec cette plaque; ceci arrive lorsque les plaques sont vieilles ou en mauvais état. Lorsque le chloroforme monte, celui ci va laisser des taches en forme de ronds (pour l'instant invisibles) pour chacun des principaux cannabinoïdes, qui nous serviront ensuite à déterminer la proportion approximative de chacun d'entre eux.
Nous laissons l'éluant remonter complètement les plaques jusqu'à atteindre la partie supérieure (environ 30 minutes). Nous les retirons alors avec soin, avant de les déposer à la verticale sur un papier absorbant, les points sur la partie inférieure. Pendant ce temps, nous préparons le mélange avec le réactif pour rendre les taches visibles. Pour réaliser cette étape nous disposons de plusieurs options, de la lumière ultra violette aux révélateurs ou réactifs favorisant la coloration des taches. Nous avons choisi l'option la plus courante et précise: nous versons 20ml d'eau distillée dans un plateau de plastique et ajoutons 0.1gr de réactif - sels- nommé Fast Blue B (C14H12N4O2Cl2 · ZnCl2) . Nous agitons bien le mélange pour que les sels se dissolvent complètement dans l'eau distillée.
Il ne nous reste plus qu'à submerger chaque plaque dans le plateau pendant à peine deux secondes (nous pourrions aussi arroser - pulvériser les plaques mais il est beaucoup plus prudent de les plonger dans le bain réactif pour éviter les projections, même si nous gâchons un peu de plus de sels) avant de les retirer et de les poser de nouveau sur du papier absorbant, toujours en position verticale et avec les marques vers le bas. Après quelques secondes, nous verrons apparaître des taches le long des plaques, qui nous signaleront la présence ou l'absence de certains cannabinoïdes (THC, CBD, CBN, CBG, THCV, CBC), ainsi que leur proportion approximative. Chaque cannabinoïde a sa couleur et sa position sur la plaque, il est ainsi facile de savoir si un cannabinoïde particulier est présent ou non dans notre échantillon. Son contenu est déterminé en mesurant le diamètre de la tache et en le comparant à une table de conversion qui nous permettra d'exprimer la proportion en pourcentage. Nous utilisons la table fournie avec le kit d'analyse de cannabinoïdes d'Alpha Cat.
Conclusions de la chromatographie sur couche mince
Bien que ne faisant pas preuve d'une aussi bonne précision que la chromatographie en phase gazeuse, cette méthode permet d'effectuer une mesure approximative des taux de cannabinoïdes présents dans un échantillon, ainsi que de vérifier leur présence ou absence. Dans notre exemple, ce test nous a été très utile, puisque l'unique chose que nous voulions savoir était si les 8 échantillons analysés présentaient un fort taux de CBD. Des 8 phénotypes analysés, 6 ont montré un contenu en CBD plus que remarquable, pour le plaisir de nombreux usagers du cannabis thérapeutique. Ce système d'analyse se révèle particulièrement utile lors des phases de sélection et de breeding, puisqu'il nous permet de déterminer facilement quelles sont les plantes qui nous intéressent sans devoir recourir à des analyses en phase gazeuse, bien plus coûteuses.
Avec cette méthode, nous pourrons ainsi réaliser nos propres analyses à la maison pour savoir quels phénotypes parmi les plantes de notre collection contiennent, par exemple, du CBD, ou encore pour savoir laquelle d'entre elles possède la plus forte concentration en THC. Il devient ainsi facile de sélectionner les individus d'une culture en fonction de leur profil de cannabinoïdes. Nous pourrons également effectuer des analyses de la même plante à différents degrés de maturation pour connaître le moment idéal pour récolter les plantes de cannabis, mais aussi selon les engrais, substrats et éclairages utilisés pour la culture pour comparer les contenus de chaque échantillon; trouver un phénotype produisant un équilibre déterminé entre ses différents cannabinoïdes, etc.
Les possibilités sont, comme nous l'avons vu, nombreuses mais il faut garder à l'esprit que les résultats obtenus ne seront pas aussi précis que par chromatographie en phase gazeuse, même s'ils restent très efficaces pour déterminer les phénotypes de plantes de cannabis méritant une analyse plus poussée. Nous vous souhaitons de bonnes analyses!
Vidéo de présentation du kit d'analyse Alpha-Cat
