Com es determina la quantitat de cannabinoides en el cànnabis?

Com fer una cromatografia de capa fina

Probablement, molts de vosaltres us pregunteu quin tipus de prova es realitza per determinar si una varietat de marihuana té grans concentracions de cannabinoides, i la quantitat d’aquestes substàncies (més o menys aproximada com veurem més endavant) que hi han en una mostra. En aquest article us explicarem pas a pas com fer una cromatografia de capa fina (CCF, TLC en anglès), que ens donarà els percentatges aproximats dels principals cannabinoides detectats en cada mostra. Per fer-ho, vam començar amb 8 mostres diferents de la varietat de marihuana Fruity Jack/Jack el Frutero de Philosopher Seeds, per esbrinar quins dels 8 fenotips analitzats tenen grans concentracions de cannabinoides CDB.

L’ús medicinal de la marihuana està guanyant terreny a marxes forçades aquests darrers anys, així com l’interès per part de criadors i cultivadors per saber les quantitats exactes de cannabinoides que contenen les seves varietats de cànnabis preferides. És per això que expressions com “cromatografia de capa fina” o “cromatografia de gasos” cada dia ens resulten més familiars. Per saber més sobre aquests sistemes d’anàlisi, ens vam reunir amb un bon amic i col·laborador d’Alchimia que ens va explicar pas a pas el sistema de cromatografia de capa fina amb el qual obtindrem resultats fiables de manera ràpida i segura per a la nostra salut.

Plaques CCF

Plaques CCF

Material necessari per fer l’anàlisi

Per procedir a l’anàlisi d’aquestes mostres de cànnabis necessitarem els següents materials:

  • Plaques per cromatografia de capa fina, que poden ser d’alumini, vidre o plàstic, recobertes sempre d’un material sòlid adsorbent (gel de sílice o alúmina)
  • Dissolvent, per fer aquest article s’ha utilitzat Hexà
  • Una micropipeta de laboratori
  • Aigua destil·lada
  • Un reactiu, en aquest cas amb sals “Fast Blue B”
  • Un Eluent, Cloroform
  • Paper secant, tubs eppendorf, pots de vidre, safata, pipeta, llapis de grafit

Preparació de la mostra de cànnabis a analitzar

Abans de començar, qualsevol persona que vulgui realitzar aquest tipus de proves que requereixen l’ús de productes químics ha de tenir un coneixement de les mesures bàsiques de seguretat en treballs de laboratori. També, com sempre que es vol fer qualsevol tipus d’experiment, s’ha d’intentar que aquest es desenvolupi en un ambient el més net i estèril possible, evitant contaminacions que puguin alterar o distorsionar els resultats de l’assaig.

El cloroform anirà pujant lentament per la placa

El cloroform anirà pujant lentament per la placa

Per a la preparació, barregem 1ml de dissolvent (Hexà) per a cada 0.1 g de mostra en un tub eppendorf. S’agita el tub durant 20 segons i es deixa dissoldre el seu contingut com a mínim 3 minuts abans de continuar. Durant tot el procés, el nostre col·laborador remarca la importància d’un correcte i cautelós etiquetatge de cada mostra perquè en el cas de voler fer diversos anàlisis, és fàcil que hi hagin confusions i que es barregin els resultats. Quan la mostra està preparada, es recullen 0.2 microlitres amb la micropipeta i es dipositen en el punt que prèviament hem marcat amb el llapis a la placa, en la seva part inferior. Per la nostra anàlisi, es van analitzar els cannabinoides de 4 fenotips de Fruity Jack/Jack el Frutero en cada placa, en totat vam fer servir dues plaques. Vam dipositar les 8 microgotes en les dues plaques (4+4) i ja tenim les nostres mostres preparades per anar al següent pas.

Descarboxilació i anàlisi de les mostres

A continuació, cal procedir a la descarboxilació de les mostres. Tenim les dues plaques amb les 8 microgotes en una safata de Pyrex que ficarem al forn a uns 120-140º durant 5-10 minuts aproximadament. Mentrestant, preparem 2 pots de vidre (un per a cada placa) amb 2ml de cloroform cadascun. Amb molta cura col·locarem les plaques dins dels pots, de manera que només la part inferior de les plaques, on hi ha les microgotes, quedi en contacte amb l’eluent. És important observar com aquest va pujant per la placa; en cas de no fer-ho de manera uniforme, probablement haurem de descartar els resultats; això sol passar quan fem servir plaques velles o en mal estat. Mentre el cloroform està pujant, va deixant un rastre en forma de taques (de moment no visibles) per a cada un dels principals cannabinoides, uns taques que més tard ens diran els percentatges aproximats.

Deixem les plaques sobre el paper assecant

Deixem les plaques sobre el paper assecant

Deixarem que l’eluent recorri completament la placa fins arribar a la part superior (uns 30 minuts). Les retirarem amb molta cura i les deixarem uns 5 minuts sobre el paper assecant en posició vertical, amb les marques de llapis a la part inferior. Mentrestant, prepararem la barreja amb el reactiu per fer visibles les taques. Per realitzar aquest procés tenim diferents mètodes, des de llum ultraviolada per revelar a reactius específics per desenvolupar la coloració a les taques. Nosaltres hem escollit l’opció més coneguda: aboquem 20ml d’aigua destil·lada en una safata de plàstic i afegim 0.1 gr d’un reactiu – sals – anomenat Fast Blue B (C14H12N4O2Cl2 · ZnCl2). Agitem bé la barreja perquè quedi uniforme i es dissolguin completament totes les sals en l’aigua destil·lada.

Aigua i sals reactives

Aigua i sals reactives

Ara només queda submergir cada placa a la safata durant uns dos segons (podríem també ruixar-les amb la barreja, però és molt més segur per a la salut submergir-les, encara que malbaratem una de liquid) abans de retirar-les i deixar-les de nou a sobre del paper assecant, sempre en posició vertical i amb les marques a la part de sota. Passats pocs segons, apareixeran unes taques al llarg de les plaques, taques que mostren la presència o no de determinats cannabinoides (THC, CBD, CBN, CBG, THCV, CBC), i la seva proporció aproximada. Cada cannabinoide té el seu color i posició a la placa, així que resulta senzill saber si un cannabinoide concret està present o no en la mostra. El seu contingut es determina mesurant el diàmetre de la taca que es compara amb una taula de conversió que ens donarà el seu contingut aproximat i el percentatge. Nosaltres utilitzem la que ve inclosa en el kit d’anàlisi de cannabinoides d’Alpha-Cat.

Conclusions de la cromatografia de capa fina

Placa CCF amb les sals reactives

Placa CCF amb les sals reactives

Malgrat no tenir la precisió de la cromatografia de gasos, aquest mètode permet obtenir una mesura aproximada de l’índex de cannabinoides presents en una mostra, així com per verificar la presència o absència d’aquests cannabinoides. En el nostre cas, per exemple, ens ha estat de gran utilitat,  perquè només volíem saber si les 8 mostres analitzades contenien índexs de CBD alts. Dels 8 fenotips analitzats, 6 d’ells han donat uns continguts de CBD més que notables, per al delit de molts usuaris de cànnabis medicinal. Aquest sistema d’anàlisi resulta especialment útil en processos de selecció i criança, ja que ens permet identificar les plantes que més ens interessen i sense la necessitat de costosos anàlisi de cromatografia de gasos.

Amb aquest mètode qualsevol pot fer les seves pròpies anàlisis a casa i saber per exemple quins fenotips dels que cultivem tenen CBD, o quins tenen una major concentració de THC. Per tant, resulta pràctic per seleccionar les plantes d’un cultiu segons el perfil dels seus cannabinoides. També podem realitzar anàlisis de la mateixa planta en diferents graus de maduresa per saber el moment ideal per collir les plantes de marihuana, però també segons els fertilitzants, substrats i la il·luminació utilitzada en el cultiu per comparar els continguts de cada mostra; trobar un fenotip que produeixi un determinat equilibri entre els seus diferents cannabinoides, etc.

Fruity Jack/Jack El Frutero, 6 de 8 fenotips rics en CBD

Fruity Jack/Jack El Frutero, 6 de 8 fenotips rics en CBD

Com hem vist, són moltes les possibilitats, però cal tenir en compte que els resultats obtinguts no tenen precisió de la cromatografia de gasos, tot i que són molt eficaços en la determinació dels fenotips de plantes que ens interessen estudiar més que necessiten d’una anàlisi més detallada. Us desitgem unes Bones Anàlisi!

Bons fums!!

 

31 de març de 2017 | Cannabinoides i terpens
0 Comentaris


Deixa un comentari

L'adreça electrònica no es publicarà. Els camps necessaris estan marcats amb *